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基因优选|NEBuilder,攻克分子克隆界的“小田原城”

版权所有,转载请联系基因市场部
2019-07-26

日本战国名城小田原城,东西长2.9公里,南北达2.1公里,城郭两旁被酒勾川和早川两条河流围绕,背靠相模湾,是座难攻不落的巨城。北条家以小田原城为根据地,统治关东地区多年。天正十七年(1589)11月,丰臣秀吉动员22万大军准备对小田原城进行包围作战。围城持续至天正十八年(1590)6月26日,小田原城西南的高地上突然出现一座巨城,史称石垣山城。面对突如其来的巨城,小田原内人心惶惶,士气低落。十日后开城投降,小田原不再“难攻不落”。自此,一统之路再无阻碍。


小田原城示意图,向左划动查看小田原包围圈及石垣山城复原图。图片来自大河剧《真田丸》及matome.naver.jp


在分子生物学技术中,将多个片段依序克隆至同一载体中,且在片段衔接处不留“疤”,一直是令科学家头疼的问题,堪称分子克隆界的小田原城。这一问题在2009年得到解决。Daniel Gibson博士和他的同事J. Craig Venter提出了Gibson组装方法。在此基础上,NEB发展出新一代 DNA 组装与克隆利器NEBuilder HiFi DNA Assembly ( E2621)。如下图所示,组装液中含有三种不同类型的酶:

1、5’外切酶,对DNA进行消化产生3’黏性末端,以便与其他片段的同源末端进行配对结合。

2、聚合酶,用于修补配对后的缺口。

3、DNA连接酶,实现无痕拼接,形成完整的双链DNA分子。

相比 Gibson Assembly而言,NEBuilder HiFi DNA Assembly (E2621) 效率更高、保真性更好,适用性更加广泛:能够对含 5' - 端和 3' - 端错配的 DNA 片段进行组装;能够用单链 DNA 寡核苷酸片段桥式连接 2 个双链 DNA 片段。

特点

“攻城利器”

适用于核酸改造


产物可直接使用


片段选择灵活


十五分钟搞定


此外,在NEB还提供了功能强大、方便易用的小工具,帮助设计组装方案。点击“阅读原文”即可开始使用。

基因有限公司是NEB最早的全国一级代理商之一,从90年代合作至今,可为您提供专业的产品支持。欲了解更多产品详情,请留言或联系您身边的基因人。



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